斐林试剂和双缩脲试剂的区别

发布时间:  2020年10月30日 04:35:35 作者:  四川教育网

 1、试剂的浓度和配制方法不同


  斐林试剂:甲液:0.1g/mL的NaOH溶液;乙液:0.05g/mL的溶液。


  使用前临时配制,在2mL的甲液中滴入4滴~5滴乙液,振荡使混合均匀后即可。


  双缩脲试剂:A液:0.1g/mL的NaOH溶液;B液:0.01g/mL的溶液。


  分别配制好A液和B液即可。


  2、试剂的作用和鉴定原理不同


  斐林试剂:


  作用:可鉴定可溶性还原糖。


  原理:甲液和乙液混合后产生沉淀,与含醛基(—CHO)的可溶性还原糖,在加热条件下反应,将还原为砖红色的沉淀。


  双缩脲试剂:


  作用:可鉴定蛋白质溶液。


  原理:在碱性溶液(NaOH)中,双缩脲()能与反应,形成紫色络合物。由于蛋白质分子中含有许多与双缩脲结构相似的肽键(—CO—NH—),因此,蛋白质都可以与双缩脲试剂发生反应而使溶液呈现紫色。


  3、试剂的使用方法不同


  斐林试剂:使用时现配现用,要水浴加热。如果斐林试剂放置一段时间,因沉淀在溶液底部而无法使用。使用时,甲液和乙液不可分别加入到待测液中,否则,待测液(苹果组织样液)中的有机酸会中和NaOH,使产生的不足而影响鉴定。


  双缩脲试剂:使用时,双缩脲试剂A液和双缩脲试剂B液要分别先后加入到待测液中,不需要加热。双缩脲试剂A液和双缩脲试剂B液不可以混合后再加入待测液。如先混合,则会产生沉淀而无产生。加入的双缩脲试剂B液()也不能过量,否则蓝色的会遮盖产生的紫色。


  4、反应中出现的颜色不同


  斐林试剂鉴定可溶性还原糖,出现的颜色变化为:浅蓝色→棕色→砖红色。


  待测液加入刚配制的斐林试剂,溶液是浅蓝色;水浴加热后,一部分被还原为砖红色的,溶液呈现两种颜色的混合色——棕色;随着反应的完成,全部被还原为,溶液呈砖红色。


  双缩脲试剂鉴定蛋白质,出现的颜色变化为:无色→浅蓝色→紫色。


  加入双缩脲试剂A液,溶液无色;再加入双缩脲试剂B液,有形成,溶液呈浅蓝色;振荡均匀后,反应完成,溶液呈紫色。